自擴增 RNA（self-amplifying RNA, saRNA，又稱自復制RNA self-replicating RNA, srRNA）憑借可細胞內自我復制、長效蛋白表達、低給藥劑量等獨特優勢，成為新一代疫苗、腫瘤免疫與基因治療領域的熱門研發方向。

但 saRNA 的研發一直面臨諸多技術壁壘：如長片段 RNA 轉錄產率不理想、dsRNA 雜質誘發強烈先天免疫、5’端加帽不匹配導致復制能力喪失等。

為解決這些痛點，TriLink推出了專門針對 saRNA 開發的一體化 IVT 試劑盒（貨號 K-7114-20），該試劑盒提供saRNA合成所需的全套核心組分，包括帽類似物、修飾與未修飾核苷三磷酸、IVT 酶、反應緩沖液以及對照 DNA 模板。如需購買TriLink公司產品，請聯系TriLink代理商欣博盛生物。

按照推薦的操作流程，該試劑盒可完成 20 次 20?μL 的反應。試劑盒單次 20?μL 反應最高可產出 150-190?μg 帶帽 saRNA（氯化鋰純化后的粗產率，濃度最高可達 7.5-9.5?mg/mL）；整套 20 次反應的試劑盒總產出約 3.0-3.8?mg。


主要優勢：

• 節約時間與成本：共轉錄加帽方案，單管即可完成全部反應；產率高、操作步驟少，減少實驗操作。

• 高加帽效率：搭配 CleanCap^® AU 帽類似物，生成 Cap 1帽子，加帽效率＞95%。

• saRNA 產量提升：依托 TriLink 專有的 CleanScript^® IVT 體系配方，以 2.4?μg 線性質粒為模板，單次 20?μL 反應最高可獲得 150?190?μg 帶帽 saRNA。

• dsRNA雜質含量極低：采用 CleanScribe™ RNA 聚合酶替代野生型 T7 RNA 聚合酶，配合 CleanScript IVT 體系，雙鏈 RNA 雜質最高可降低 85%（具體效果因修飾類型而異）。

• saRNA 性能增強：使用CleanCap AU、CleanScribe RNA 聚合酶搭配 5-甲基胞苷（5mC）合成的 saRNA，蛋白表達效果好，炎癥反應低。

數據展示：

圖一：CleanCap^® AU saRNA IVT Kit相較于常規IVT Kit所生成的WT saRNA和5mC修飾saRNA在產量，純度以及完整性上表現更優。

圖二：CleanScribe™ RNA 聚合酶相較于野生型T7 RNA 聚合酶，在 saRNA合成中可顯著降低 dsRNA 雜質的生成且產量幾乎沒有損失，該酶不會破壞 RNA 完整性，轉錄產物全長質量與野生型T7 RNA 聚合酶相當。

圖三：CleanCap AU可以實現優異的蛋白翻譯表達。當兩種帽子加帽效率都＞95%時，對于 VEEV 骨架 saRNA，AU-Cap 的蛋白表達能力顯著優于傳統 AG-Cap。

圖四：未經核苷修飾但搭載 CleanCap AU 帽的自擴增 RNA（saRNA，曲線 A），與經 N1-甲基假尿嘧啶（N1MePsU）修飾且搭載 CleanCap M6 帽的常規 mRNA（曲線 B）分別轉染 HEK293T 細胞后，進行蛋白表達情況對比，saRNA相比普通 mRNA，蛋白表達水平更高、持續時間更長。

圖五：不同IVT制備的saRNA遞送后的A549細胞活力比對。5 mC修飾提高了細胞耐受性，證實5mC修飾能通過抑制先天免疫激活，有效改善轉染后細胞的耐受性與生存狀態。


重要提示：

1. 本試劑盒專為 CleanCap^® AU 加帽的 saRNA 體外轉錄而專門配制和優化，不適合常規 mRNA 合成，也不建議搭配其他類型的帽類似物使用。

2. 用戶需要自行設計并準備IVT模板；PCR 模板尚未在 saRNA 體系完成驗證，必須使用完-全線性化的質粒模板。

試劑盒組分:

• CleanCap^® Reagent AU

• Adenosine-5′-Triphosphate (ATP)

• Cytidine-5′-Triphosphate (CTP)

• Guanosine-5′-Triphosphate (GTP)

• Uridine-5′-Triphosphate (UTP)

• 5-Methylcytidine-5′-Triphosphate (5mC)

• AU CleanScribe™ RNA Polymerase Mix

• 10X AU CleanScript™ IVT Buffer

• saRNA FLuc Control DNA Template (linearized)

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